《中国药典》2025年版一部大青叶公示稿修订梳理及研究思路解析

2024年6月，国家药典委发布修订公示稿，主要修订点如下：

1、 药材修订了薄层鉴别项目，在靛玉红、靛蓝鉴别基础上，增加对照药材鉴别项目

2、 增加了杂质检查项目

3、 药材修订了含量测定项目，在靛玉红项目基础上，增加靛蓝含量测定项目，建立两个化合物同时测定方法，优化供试品溶液制备流程

4、 同时修订饮片标准，包含杂质和含量测定

为全面了解标准修订情况，岛津技术团队与起草单位河北省药品医疗器械检验研究院做了详细了解，供中药行业相关单位参考。

• 现行版药典大青叶标准及中成药标准概况

靛蓝、靛玉红是目前大青叶及其制剂关注度较高的质控指标，目前药典药材含量测定仅收载靛玉红项目测定方法。药典共收载27 个含大青叶的中成药，19个靛蓝或靛玉红的薄层鉴别项，均未设置大青叶含量测定项。

• 现行版药典大青叶标准含量测定方法及标准修订难点

靛玉红采用三氯甲烷索氏提取、高效液相色谱法测定。但靛蓝在三氯甲烷中解度差，且对光和热存在一定程度的不稳定性，若仍采用原方法，将造成提取不完全或分解、对照品难以配制等问题，影响含量测定准确性。

• 标准立项目的

优化《中国药典》大青叶质量标准含量测定的指标及方法，解决大青叶原标准含量测定指标成分单一、方法繁琐等问题，提高大青叶供试品溶液中靛蓝、靛玉红的提取率及稳定性，优化大青叶药材及饮片的质量控制方法，同时为大青叶中成药含量测定方法的建立提供技术支撑。

• 起草使用仪器和色谱柱

• 方法优化-方法初选

提取溶剂的选择：根据靛蓝、靛玉红溶解性及实际实验效果，在三氯甲烷、甲醇、DMF等多种溶剂中进行考察，最终显示DMF对二者均有良好的溶解性，但供试品溶液在测定过程中呈现较差的稳定性。针对靛蓝、靛玉红在中性、碱性溶液中不稳定的性质，最终确定使用含磷酸的DMF 溶液作为提取溶剂，结果显示溶解度、稳定性均良好。

提取方式的选择：当用加热回流的⽅式进行提取时，靛蓝已检测不到；当用 100℃热浸时，靛蓝含量也有不同程度的减少；当用超声提取时，靛蓝亦有分解。最终确定采用振摇提取，该法提取率高且稳定性好。

• 提取条件的单因素考察

磷酸体积分数：各因素对含量的影响作性原则 ，权衡高效和普适，为避免高浓度磷酸溶液的低pH 值对色谱系统的影响，以近平缓的5% 磷酸体积分数为理想试验区域。

振摇时间：靛蓝、靛玉红具有不同程度的光不稳定性，为避免影响实验结果，并考虑到方法的经济性，以40 min振摇时间为理想试验区域。

料液比：两个成分含量随液料比的变化趋势一致，在（20∶1）～（80∶1） mL·g^–1范围内，含量呈上升趋势，在50∶1 mL·g^–1时趋于平缓。

各因素对含量的影响

• Box-Behnken 响应面法优化提取方法

各因素交互作用对含量影响的响应面图和等高线图

通过软件优化得到实验条件下的最佳工艺条件及预测的结果，即最佳提取大青叶中靛蓝、靛玉红的方法为：磷酸体积分数5. 345%，振摇时间40 min，液料比50∶1 mL·g^–1，靛蓝、靛玉红含量预测值分别为746. 659、392. 032 μg·g^–1。实际操作确定方法为磷酸体积分数5%，振摇时间40 min，液料比50∶1 mL·g^–1，进行验证试验，得到靛蓝、靛玉红含量平均值为735. 517、399. 123 μg·g^–1，与预测值的RSD 为0. 8%、0. 9%，验证建立的回归模型可靠，优化的方法实际可行。

• 方法学考察典型图谱

混合对照、样品⾊谱图  峰 1 靛蓝 峰 2 靛⽟红

• 样品测定与限度制定

取药材 15 批和饮⽚ 20 批，按正⽂⽅法测定。收集到的样品中靛蓝和靛⽟红总量在 0.056%~0.435%之间，最低值为 0.056% ，平均值为 0.165%，对比了不同批次药材及饮⽚的性状，并没有发现明显的差异或不符合性状描述的批次。故暂0.050%作为⼤⻘叶中靛蓝与靛⽟红总量的限度值。

• 标准修订工作相关成果

与大青叶现行质量标准药典采用三氯甲烷索氏提取测定靛玉红含量的方法相比，优化方法科学选择了提取溶剂为含磷酸的DMF 溶液，振摇提取的方式，明确了高效、经济、稳定测定大青叶中靛蓝的新方法，可同时测定靛蓝与靛玉红含量，操作简便，结果准确。

河北省药品医疗器械检验研究院在《中国医院药学杂志》2024 年 3 月第 44 卷第 5 期刊登“响应面法优化《中国药典》大青叶含量测定方法及差异分析”文章。

参考文献：[1]王晓蕾,孙慧珠,刘晓明,等.响应面法优化《中国药典》大青叶含量测定方法及差异分析[J].中国医院药学杂志,2024,44(05):557-563.DOI:10.13286/j.1001-5213.2024.05.11.

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