司小令大讲堂第三季第四期丨样品溶剂对峰形的影响

司小令大讲堂第三季《HPLC日常分析中的注意事项之二》，继续分享液相色谱的使用知识。

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恭喜以上五位老师，礼品将于本周寄出。

在反相色谱分析中，您有过这样的经历吗?

“标准品溶液(甲醇溶剂)和待测样溶液(水提取液)进样量相同时，为什么标准品溶液的样品峰更宽？”

“使用甲醇作为溶剂进样，进样量增加一倍时，为什么分离变得极差，甚至峰裂分了？”

这与液相色谱分析中的“溶剂效应”有关，今天来聊聊它们的原因吧。

图1展示了当样品溶剂改变时，咖啡因样品的理论塔板数(N)的变化。

1) 采用与流动相相同的样品溶剂时（甲醇/水=3/7），进样量达100μL以上时可明显地观察到理论塔板数N的下降(峰变宽)。

2) 当样品溶剂为100%甲醇，进样量10μL时理论塔板数 N明显下降（产生前延峰如图2)，而进样量增大到100μL时，样品从非保留时间就开始提前慢慢地洗脱，N值降到了100以下。因为样品溶剂在柱内作为流动相的一部分，这时甲醇作为洗脱力强的流动相工作，从而带动了样品的洗脱加快。

3) 当使用水作为样品溶剂时，即使1mL的大体积进样，理论塔板数也没有下降，相反还有稍稍上升的倾向。同时会产生与1mL体积相应的保留时间的延迟。这是由于样品溶剂水作为洗脱力弱的流动相工作，咖啡因样品会在柱入口处停留浓缩，当流动相（甲醇/水=3/7）到达柱入口时重新开始分离，这时往往能够保持较好的峰型。

样品溶剂的种类会对色谱峰的形状和保留时间产生影响，当样品溶剂的洗脱力强、进样量大时影响更为突出。

对此，向大家介绍一个非常简单且实用的技术：岛津液相色谱仪自动进样器的基本功能“Co-injection”。通过简单的参数设定，可以在不改变原有样品浓度的情况下，自动地在进样过程中同时注入“弱化”溶剂，以降低进入色谱柱的样品溶剂强度，从而有效解决“溶剂效应”带来的影响。

请在文末留言您的答案吧。

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