大咖说：LCMS调谐那些事（上篇）
我们在使用三重四极杆液质联用仪的过程中，免不了要对质谱进行调谐。但是我们为什么要调谐、在什么时候做调谐、调谐如何操作、调谐结果的好坏怎么来判断、调谐不能通过我们该怎么办？
面对这些问题，可能有的小伙伴还是一头的雾水，茫然无措。本文就针对以上问题，说清关于调谐的那些事，希望对各位小伙伴有所帮助。
调谐的目的
调谐就是对质谱进行校准。通过调节透镜系统、质量分析器和检测器的各个电压参数，获得合适的分辨率、灵敏度和准确的质量数。
什么情况需要做调谐
● 质谱安装、维修或维护后，确认质谱的性能时，需要对质谱进行调谐。
● 长时间不开机，再次开机时，需要对质谱进行调谐。
● 测试样品过程中，出现大的质量数偏差，灵敏度降低或质谱信号异常等情况时，需要对质谱进行调谐，验证质谱是否正常。
● 四极杆质量分析器型质谱，属于低分辨率质谱，因此其一般比较稳定，不需要经常调谐。
调谐液的组成
岛津三重四极杆液质的调谐液，采用聚乙二醇（PEG）200，600，1000，聚丙二醇（PPG）2000，棉籽糖以及醋酸铵的混合物为溶质，以色谱纯甲醇和超纯水（2：8）为溶剂。具体浓度如下所示：
质量调节校正的质量数
用于正离子模式：
利用PEG,PPG分子添加铵离子实现自动调谐质量校准。
PEG+NH4
PPG+NH4
用于负离子模式：
棉籽糖：C18H32O16
利用棉籽糖503.16（M-H）去质子化和二聚体离子1007.33（2M-H）实现自动调谐质量校准。
岛津三重四极杆质谱仪的调谐液编号为“LT1-500005-16”，名称为“调谐液标准物质1#”，需要冷藏保存，保质期为一年。需要新的调谐液可以向岛津技术部购买。
如何调谐
岛津三重四极杆型质谱使用ESI源，采用自动调谐的方式对质谱进行校正，无需手动输入参数，整个过程简单方便，具体如下：
1. 打开前门，将调谐液倒入调谐专用瓶内，倒入体积控制在40-80ml，确保导管能插入调谐液内。完成一次自动调谐，大约消耗1ml调谐液。
2. 卸下连接LC的peek管，换上调谐专用管，红色阻尼管一端与调谐液瓶接口相连，另一端与质谱相连。调谐必须使用调谐专用管连接，此管由红色阻尼管和40cm长内径为0.25mm的peek管组成。调谐开始后，质谱会向调谐液瓶施加100kPa的恒定气压，此压力将调谐液输送入质谱。调谐液管的红色阻尼部分，可以起到控制调谐液流速的作用，因此必须专用。
图示：调谐专用管连接方法
3. 打开LabsolutionsLCMS工作站，进入实时分析界面，在左侧主项目中，选择“调谐”，进入“文件”，选择“新建调谐文件”，点击“自动调谐开始”
，弹出自动调谐执行界面，开始自动调谐。
图示：自动调谐执行界面
4. 自动调谐的过程根据分析模式（Q1、Q3、MS/MS）来执行，如下图所示，整个过程约为40分钟，完成后保存调谐结果。
● 检测器电压调整：根据m/z168质荷比的强度情况，调整检测器电压，此电压确定后，所有分析模式均采用此电压作为检测器电压。
● 灵敏度调整：对透镜系统的各项电压参数进行调整，以确保各质荷比（m/z）的灵敏度达到要求。
● 分辨率调整：通过对Q1和Q3 RF的电压调整，使质谱峰的半峰宽FWHM达到设定的要求，LCMS8030/40FWHM设定为0.6，LCMS8045/50/60设定为0.7。
● 质量校准：根据标准样品中的离子来校准质谱的质量轴。
● 质谱峰形测量：采集并显示调谐测量的质谱峰形。
●扫描测量：采集并显示调谐测量的质谱扫描结果。
5. 保存调谐文件，当自动调谐执行界面进度达到100%后，自动调谐界面会关闭，代表调谐结束。此时，我们要选择“文件”中的“调谐文件另存为”，保存该调谐文件到指定的文件夹内。保存后，系统会弹出对话框咨询，是否将此调谐文件设置为默认调谐文件，选择“是”，一般将最新的调谐文件作为默认调谐文件使用。
本期讲了调谐的目的、调谐液的组成和自动调谐的全过程，各位小伙伴都掌握了嘛？自动调谐结束，调谐报告如何评价？自动调谐无法通过，我们该如何处理？预知这些问题，请见下回分解。
洪韫嘉
■ 资深液质工程师
欢迎关注，让更细致的服务从这里起航
