1、提取
称取约5 g（精确至0.0l g）试样，置于50 mL离心管中；添加100μL内标标准工作溶液（0.1μg/mL）；加入12 mL三氯乙酸溶液（20 g/L，pH 4.8）和2.5 mL乙腈；振荡混匀3.0 min，超声10 min；于15000 r/ min离心5 min，取上清液；再加入10 mL三氯乙酸溶液（20 g/L，pH 4.8）重复提取一次；离心后合并上清液，定容至25 mL的容量瓶中。
2、酶解
准确移取5 mL 以上提取液，加入1.0 mL乙酸铵溶液（2.0 mol/L，pH 4.8），混匀，再加入100μL酸性磷酸酯酶（100μg/mL），加盖后涡旋l min，于恒温烘箱中37 ℃培养2 h。取出后冷却至室温，用氨水调pH至8.5（±0.1），混匀，于4000 r/ min离心5 min，取上清液待净化。
3、净化
SHIMSEN PBA SPE cartridges，100 mg / 3 mL（货号：380-00928-02）
（1）活化：依次加入3 mL乙腈、3 mL 乙腈-1%甲酸水（V : V = 3 : 1）、3 mL乙酸铵（0.25 mol/L，pH=8.5）；
（2）上样：加入待净化液，控制上样流速小于3 mL/min，弃去流出液；
（3）淋洗：依次加入5 mL 10%乙腈-乙酸铵（0.25 mol/L，pH=8.5）、2 mL 5%氨水甲醇，弃去流出液，于负压装置（货号：RT-26077）中将小柱抽干；
（4）洗脱：加入4 mL 甲酸-水-甲醇（V : V : V = 2 : 8 : 90）洗脱，收集洗脱液；
（5）重新溶解：于45℃氮吹至近干，加入1 mL乙腈-水（V : V = 9 : 1）重新溶解，涡旋1 min，经0.22μm滤膜过滤，待检测。
