慧眼识别荧光峰
● 导言
在使用RF-6000荧光分光光度计时,我们经常需要用样品的荧光峰来进行定性或者定量,但由于未知样品的荧光峰经常与散射峰、拉曼峰等混在一起,对于初学者来说有些难以分辨,通过下面的介绍希望我们对辨别荧光峰有更多的认识。
如何在众多的干扰峰中找到荧光峰
上图为激发波长282nm时,测定的水杨酸苏打水溶液发射光谱图,我们据图上标识来进行分析:
瑞利散射:
发射波长与激发波长相同的峰,由光的弹性碰撞造成,固体粉末样品较为明显,峰强度一般较大。
✔ 对策:
1、在扫描发射光谱时,可以设置发射波长的起始波长略高于激发波长且终止波长略低于激发波长的2倍,以避开散射峰和倍频峰。因为一般发射波长比激发波长要长。
2、在发射侧放置合适滤光片,过滤激发散射光。
拉曼散射:
溶剂的拉曼散射峰,比如:EX=350nm时,水会在397nm附近产生拉曼峰。
✔ 对策:
改变激发波长,拉曼峰的位置会发生改变,而荧光峰的位置不会发生改变,以此来区分。
2次光、3次光:
发生在激发波长2倍、3倍出的光,这是由光栅的特性决定的。
✔ 对策:
使用截止滤光片或者设置合适的扫描范围避开激发波长的倍数。
重点:通过避开或加滤光片去掉散射峰和倍频峰,通过改变激发波长排除拉曼峰,一般都能找到样品的荧光峰。
使用3D扫描找到荧光峰
RF-6000可以进行3D扫描,即同时进行激发光谱和发射光谱的扫描,通过等高线图快速定位荧光峰,同时一张3D图可以清晰的看到可能存在的瑞利散射,2倍峰、3倍峰,拉曼峰。
重点:可以使用60000nm/min进行快速3D扫描,找到大致的最大激发和发射波长,然后缩小范围进行发射波长的精细扫描以确定精确的最大发射波长和荧光峰。
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