排除基质干扰｜特殊医学用途婴儿配方食品中维生素B6的测定(GB 5009.154-2023)
排除基质干扰
特殊医学用途婴儿配方
食品中维生素B6的测定
(GB 5009.154-2023)
新标准《GB 5009.154-2023食品安全国家标准 食品中维生素B6的测定》已发布。对比GB 5009.2016，新标准换用了庚烷磺酸钠体系，采用高比例水相(95%)、等度流动相进行测定。但在测试复杂样品，如乳蛋白深度水解等特殊工艺的配方粉时，低极性的杂质组分会存在柱上残留的现象，重复进样后，可能与目标物共流出，干扰定量结果。针对以上问题，SGLC推出了优化方案，推出了适合复杂基质的梯度洗脱方案，有效避免杂质组分的柱上残留，具体方案如下：
1.1 实验仪器及耗材
Shimadzu LC-20AD 高效液相色谱仪；
色谱柱：ShimNex CS C18（5 μm，4.6×150 mm；P/N：380-01230-02）；
纯水机：PR-FP-0120α-MT1（+60L水箱+取水器）
SHIMSEN Disc 尼龙双膜针头过滤器（P/N：380-00326）；
LC/MS 认证样品瓶 LabTotal Vial（P/N：227-34001-01）；
SHIMSEN Pipet 移液枪：SHIMSEN Pipet PMII-10（ P/N：380-00751-02）；
SHIMSEN Pipet PMII-100（P/N：380-00751-04）；
SHIMSEN Pipet PMII-1000（ P/N：380-00751-06）。
1.2 混合标准工作溶液的制备
分别准确称取盐酸吡哆醛、盐酸吡哆醇、盐酸吡哆胺标准品适量，加 0.1 mol/L 盐酸溶液配制成每 1mL 含 1mg 的溶液作为标准储备液；分别取吡哆醛、吡哆醇、吡哆胺标准储备液适量，加流动相 A 制成每 1mL 分别含吡哆醛、吡哆醇、吡哆胺 20μg 的混合标准中间溶液；取维生素 B6 混合标准中间溶液适量，加水制成每 1mL 分别含吡哆醛、吡哆醇、吡哆胺40ng 的混合标准工作溶液。
1.3 试样溶液的制备
称取试样 2g（精确至 0.01g）于150mL 锥形瓶中。加入 25mL 45℃的水，混匀。静置 10min，冷却至室温。用0.1mol/L 盐酸溶液调节上述试样溶液的pH至1.76，放置1min。再用0.1mol/L 氢氧化钠溶液调节试样溶液的 pH 至4.42。把上述锥形瓶放入超声波振荡器中，超声振荡约10min。将试样溶液转移至 50 mL容量瓶中，用水冲洗锥形瓶。洗液合并于 50mL容量瓶中，用水稀释至50mL。另取 50mL锥形瓶，上面放入漏斗和滤纸，把稀释后的试样溶液倒入其中，自然过滤。滤液再经 0.45μm微孔滤膜过滤后转移1mL至棕色进样瓶作为试样待测液。
1.4 分析条件
色谱柱：ShimNex CS C18（5 μm，4.6×150 mm；P/N：380-01230-02）
柱温：30 ℃
检测波长：激发波长 293 nm，发射波长395nm
流速：1.0mL/min
进样量：20µL
流动相：A：庚烷磺酸钠与三乙胺混合溶液：称取庚烷磺酸钠 2.0 g，用 950 mL 水溶解， 准确加入 4.0 mL 三乙胺，用冰乙酸调pH至 3.07，然后转移至1000mL容量瓶中，并以超纯水稀释至刻度，经 0.45 μm微孔滤膜过滤。
B：甲醇
梯度程序如下：
1.5 实验结果
色谱图-混合工作标准溶液(吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺)
色谱图-样品溶液(乳蛋白深度水解配方奶粉)
1.6 结论
本文建立了特殊医学用途婴儿(乳蛋白深度水解)配方食品中维生素 B6的 HPLC 测定方法。参照新国标 GB 5009.154-2023《食品中维生素 B6 的测定》中第三法色谱条件并进行优化， 采用色谱柱ShimNex CS C18 分析特殊医学用途婴儿(乳蛋白深度水解)配方食品中维生素 B6，结果显示，吡哆醛、吡哆醇、吡哆胺峰形对称， 与相邻杂质峰基线分离，满足日常检测要求。此方法可为食品中维生素 B6的检测提供参考。
