药典委中成药中马兜铃酸Ⅰ检查指导原则已公示岛津解决方案来助力

导语

SHIMADZU

马兜铃酸（AAs）为硝基菲类有机酸类化合物。这类有机化合物天然存在于诸如马兜铃属及细辛属等马兜铃科植物中。其中马兜铃酸Ⅰ是马兜铃属植物中毒性最强的成分。另有研究发现，不但马兜铃酸具有肾毒性，其代谢产物马兜铃内酰胺同样具有肾毒性。

中成药中马兜铃酸Ⅰ检查指导原则标准草案发布

2024年12月6日，国家药典委发布“关于中成药中马兜铃酸Ⅰ检查指导原则标准草案的公示”。

正文

指出马兜铃酸类物质成分的种类及药材类别，提到本指导原则适用于中成药中马兜铃酸Ⅰ检查，提供某中成药中马兜铃酸Ⅰ检查示例方法。

以下内容引自药典委网站公示稿。

附注

1、中成药中马兜铃酸Ⅰ的测定属于毒性成分检査范畴，测定方法可以参考本指导原则的方法，亦可对本方法进行合理优化，但均需参照《中国药典》2020 年版四部 9101分析方法验证指导原则进行验证。建议采用液相色谱-串联质谱法对中成药中马兜铃酸I进行检查。实验室应建立必要的质控手段，保证测定结果准确。

2、根据各品种马兜铃酸Ⅰ的含量情况，及仪器灵敏度试验确定适宜的供试品取样量及稀释倍数。示例中成药日服用量40g。但马兜铃酸毒性不等同于含有此类成分的中药材、饮片及制剂的毒性，各生产单位及药品上市许可持有人应加强研究，制定合理的限度。

3、本方法提供的色谱条件、监测离子对测定条件等为参考条件，各实验室可根据样品处方干扰情况和所配置仪器的具体情况做适当调整、优化。

4、进行样品测定时，如检出色谱峰的保留时间与对照品一致，在扣除背景后的质谱图中，所选择的 2 个监测离子对均出现，且所选择的监测离子对峰面积比与浓度相当的对照品的监测离子对峰面积比一致(相对比例 >50%，允许+20%偏差:相对比例20%~50%,允许+ 25%偏差:相对比例10 %~20 %,允许+30%偏差;相对比例<10%,允许±50%偏差)则可判断样品中存在马兜铃酸Ⅰ。如果不能确证，选用其他监测离子对重新进样确证或选用其他检测方式的分析仪器来确证，如选用高分辨质谱等手段确证。

5、根据待测样品处方和剂型特点可采用更为适宜的供试品溶液制备方法。基质效应是干扰分析结果准确性的重要因素之一，在分析方法考察中须高度重视。必要时，应建立适宜的供试品溶液净化方法。

岛津解决方案

SHIMADZU

针对于标准草案的发布及行业聚焦中成药中马兜铃酸检测的研究，岛津快速应对，为马兜铃酸的检测及研究提供整体解决方案。

分析仪器

HPLC&UHPLC-MS/MS

DPiMS（原位探针电喷雾离子源质谱仪）

耗材

• 马兜铃酸前处理专用小柱：SHIMSEN Styra AAs （60mg/3ml 50pcs，P/N：D380-00877-39）

✔ 优化技术填料，回收率好；

✔ 净化效果优

✔ 操作方便、快捷

✔ 产品有性价比

• 马兜铃酸分析色谱柱：Shim-pack Velox C18（1.8μm，2.1*100mm；P/N：227-32007-03）

• 马兜铃酸类物质异构体分析柱：Shim-pack Velox PFPP（1.8μm 2.1x100mm；P/N：R227-32019-03）

✔ 核壳技术填料，更高分离度，更快分析结果

✔ 更高灵敏度

✔ 优异的稳定性和重现性，确保数据的可靠性

应用案例 1

清肺止咳丸中马兜铃酸Ⅰ的检测

1、灵敏度与专属性

马兜铃酸ⅠMRM色谱图（0.4ng/mL）

清肺止咳丸样品中马兜铃酸Ⅰ MRM色谱图（<0.4ng/mL）

2、线性范围

马兜铃酸Ⅰ校准曲线

3、精密度实验

0.4ng/mL和1ng/mL 重复性色谱图

4、实际样品检测和回收率实验

样本实测：取市售清肺止咳丸样品按本方法测定，检测到马兜铃酸Ⅰ，含量为 1.35 ng/g(0.054 ng/mL)。准确度考察:在样品中分别添加 10 ng/g(0.4ng/ml)浓度水平和 25 ng/g(1ng/mL)浓度水平马兜铃酸进行加标回收实验，回收率分别为 105.4%和114.9%。

应用案例 2

复杂样品人参再造丸中马兜铃酸Ⅰ的检测

1、样品净化

通过对SHIMSEN Styra AA小柱进行活化平衡、上样淋洗、洗脱，最后加水定容至5 mL，过0.22 μm滤膜，供 LC-MS/MS 分析。通过SHIMSEN Styra AA小柱的净化，排除目标峰旁的杂质峰，也可消除基质干扰带来的离子比率的偏差。

净化前图谱

净化后图谱

2、不同色谱柱的响应差异对比图

Shim-pack Velox C18的响应是岛津前一代色谱柱的2.5倍（同等实验室条件下），对比如下图

Shim-pack Velox C18

岛津前一代色谱柱

3、加标回收率结果

以上案例，如需要详细了解，可联系岛津获取全文。

应用案例 3

UHPLC-MS/MS测定九味羌活颗粒中7个马兜铃酸类成分

7个马兜铃酸类成分的MRM色谱图

难点解决：异构体分离

由于测定的马兜铃酸类成分的结构比较类似，尤其是AA-Ⅰ与AA-Ⅲ结构极其相似，因此存在相同结构碎片，在AA-Ⅲ的定量通道中AA-Ⅰ也会出现色谱峰，若2个结构很相似的成分在色谱分离时分离不开，在质谱进行定量分析时可能会出现假阳性结果。因此，本研究选用选择性更强、对同分异构体有良好分离效果的Shim-pack Velox PFPP色谱柱。