蛋白质结构分析小帮手-岛津蛋白测序仪PPSQ-51A/53A梯度系列

在生物体内包含有各种功能的蛋白质，这些蛋白质经过处理后成为成熟蛋白质并被释放到细胞外，它们在相互作用下可能会导致疾病。为了了解这些疾病的病因、并在疾病的预防、诊断、治疗及药物开发研究等方面取得进展，鉴定微量样品氨基酸序列的蛋白质鉴定分析工作就变得越来越重要。

蛋白质N-端的序列组成对于蛋白质整体的生物学功能有着巨大的影响力。对蛋白N-端测序中常用Edman降解法，其基本原理包括三个主要的化学步骤：①异硫氰酸苯脂与蛋白质和多肽的N-端残基的偶联、②苯氨基硫甲酰酞（PTC-肽）环化裂解、③噻唑呤酮苯氨（ATZ）转化为苯异硫尿氨基酸（PTH-氨基酸），每个循环从蛋白质与多肽裂解出一个氨基酸残基，同时暴露出新的游离的氨基酸进行下一个Edman降解，最后通过转移的PTH-氨基酸鉴定实现蛋白质序列的测定。此原理设计出的自动分析仪进行分析时，能够可靠地测定肽链的30个左右氨基酸残基序列，最多可以分析50-60个氨基酸残基。

岛津最新款蛋白测序仪PPSQ-51A/53A梯度系列以Edman降解法为基础，将蛋白质N-端顺次切断进行序列分析，产品具有灵敏度高、等度洗脱、简便数据处理（差减色谱图）、符合FDA 21 CFR part11规定、自动生成报告、长序列分析等特点，可以实现更灵敏、更可靠的蛋白质N-端端氨基酸序列分析，能够满足用户对微量样品氨基酸序列的蛋白质鉴定分析的各种需求。

★ Calmodulin的氨基酸序列分析

使用岛津蛋白测序仪PPSQ-51A/53A梯度系列，在下述的分析条件（表1）下对500 fmol的PTH-氨基酸标准品进行分析与矫正，从结果（图1）可以得出该产品满足进行微量PTH-氨基酸混合溶液的检测要求。

将Calmodulin（Merck cat#C4874）溶解于0.1%三氟乙酸水溶液中，调制浓度为1 pmol/µL的样品溶液。在经过聚凝胺处理的玻璃纤维盘中添加2µL的样品溶液，进行氨基酸序列分析。

各循环色谱图（图2）所示，其中第1个循环的色谱图作为原始色谱图，之后循环的色谱图使用差减色谱图表示。所有的30个循环内，我们都能够检测到PTH-氨基酸并鉴定氨基酸序列，并且结果与理论序列一致。

岛津最新款蛋白测序仪PPSQ-51A/53A梯度系列在蛋白质的N末端部氨基酸序列分析中，即使是微量样品情况下，也可以完成氨基酸序列鉴定工作。其在无数据库支持情况下，也可完成微量样品的蛋白质结构分析，是蛋白质的氨基酸序列分析工作中的重要工具。