2025年版《中国药典》人用重组单克隆抗体及单抗生物类似药检测

人用重组单克隆抗体制品，系指采用各种单克隆抗体筛选技术、重组DNA技术及细胞培养技术制备的单克隆抗体治疗药物，包括完整免疫球蛋白、具有特异性靶点的免疫球蛋白片段、基于抗体结构的融合蛋白、抗体偶联药物等。其作用机制是通过与相应抗原的特异性结合，从而直接发挥中和或阻断作用，或者间接通过Fc效应子发挥包括抗体依赖和补体依赖细胞毒作用等生物学功能。

人用重组单克隆抗体制品具有复杂的质量属性，本总论以哺乳动物细胞大规模培养技术制备的IgG型单克隆抗体制品为重点，阐述人用重组单克隆抗体制品生产和质量控制的通用性技术要求。具体品种还应同时符合“人用重组DNA蛋白制品总论”与抗体制品相应各论的要求。

人用重组单克隆抗体制品质量控制应根据制品关键质量属性、对制品和工艺理解认识的积累和风险评估的原则制定，应根据重组单克隆抗体制品内在固有质量属性的差异与不同，确定制品的关键质量属性（CQA），选择相应适宜的分析方法开展质量检定。

本版药典结合临床应用实际，进一步扩大了抗体药物收载范围，新收载5个抗体类药物品种，加快近年来国内具有领先优势的已上市品种和相关技术向国家标准转化。下面以“注射用曲妥珠单抗”为例，详细介绍单抗生物类似药检测要求。

注射用曲妥珠单抗在治疗多种HER2阳性的癌症中发挥着重要作用。曲妥珠单抗的作用机制主要是抑制PI3K/AKT信号通路、诱导细胞周期阻滞、介导抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用（ADCC）、抑制DNA损伤修复、抑制血管生成及诱导免疫应答等。当HER2蛋白膜内段的酪氨酸残基磷酸化后，能激活多种信号转导通路，这些通路的异常与肿瘤的生长密切相关。曲妥珠单抗特异性地作用于HER2蛋白的细胞外IV区，通过多种机制抑制肿瘤细胞的生长和增殖，包括阻断HER2同源二聚体和异源二聚体的形成、介导HER2受体的内吞和降解、阻断特定信号通路、诱导细胞周期停滞、促进肿瘤细胞凋亡、抗肿瘤血管生成、诱导抗体依赖细胞介导的细胞毒作用等。

曲妥珠单抗（Trastuzumab），1998年由美国食品与药物管理局批准上市，2002年我国批准用于治疗HER2阳性转移性乳腺癌。截至2024年9月底，国内已有5家企业生产的注射用曲妥珠单抗获批上市，其中复宏汉霖有两个规格的产品获批。这些产品的上市为HER2阳性的乳腺癌和胃癌患者提供了更多的治疗选择。

曲妥珠单抗是一种人源化单克隆抗体，系由含有可高效表达曲妥珠单抗基因的中国仓鼠卵巢（CHO）细胞，经细胞培养、分离和高度纯化后获得的曲妥珠单抗无菌冻干品。该注射液的质量标准涵盖多个检测项目，质量标准摘录见表。

岛津在重组单克隆抗体药物研发、生产、质控和临床试验阶段均有一系列的色谱、质谱、光谱等多机型分析手段，应对抗体药物的一系列分析需求，例如：分子量测定、序列分析、翻译后修饰分析、电荷异质性分析、杂质分析、细胞培养过程监控、药代动力学分析等。

由于单克隆抗体（mAb）结构复杂并具有不均匀性，因此该类药物中会存在电荷异构体与电荷变异体。电荷差异会对单抗药物稳定性和有效性产生影响，因此必须对电荷变异体进行准确评价。根据电荷强度的不同，IEX可用于分离mAb电荷变异体。本次实验对3种mAb进行了电荷变异体评估。

在单克隆抗体（单抗）药物的生产过程中，需测定细胞培养上清液中单抗的滴度或浓度，以选出高产量的单抗药物。此外，在药品的生产过程中还可能会产生聚集体和碎片，其与主产品具有不同的药效，有时会引起严重的副作用。本文介绍了一种采用在线二维液相色谱法测定单抗药物的滴度和大小变异体含量的方法，一维使用Protein A亲和色谱柱对单抗溶液进行分离，通过阀切换将收集到定量环中的单抗组分转移到二维，利用SEC色谱柱分离样品中的大小变异体和单体，从而实现全自动在线二维液相分离单抗药物的目的。

单抗单体、聚集体和碎片峰面积及百分比

本文参考2025版药典“通则 3102 唾液酸测定法”，建立了一种使用带荧光检测器的超高效液相色谱 Nexera LC-40X3 检测抗体药物中唾液酸含量的分析方法，分析条件见表11。样品经超滤脱盐，再经醋酸水解释放唾液酸，然后以 DMB 衍生标记后上机测定。方法线性范围宽（图6）、灵敏度高、重复性好、准确可靠（图7），可为抗体类药物中唾液酸含量测定提供参考。

Neu5Gc和Neu5Ac校准曲线图（浓度为0.02~400μmol/L）