LC检测器华山论剑：“卓越”而“专一”的荧光detector

岛津荧光检测器具有接近质谱检测器的超高灵敏度，样品检出限可以达到ppb级别，灵敏度在所有LC检测器中排名第一，不仅如此，荧光检测器还具有线性范围宽，受环境因素影响小等诸多优点，在环保，医药，生化分析等领域有着广泛应用，起着不可替代的作用。荧光检测器如此卓越的性能能否完全替代其它种类检测器呢？答案是否定的，荧光检测器还具有很强的专一性，只对某一类物质有极高的响应，下面让我们一起掀起它的盖头来。

图示：RF-20A荧光检测器

检测物质及原理

荧光检测器只能检测能够发射荧光的物质或经过衍生后具有荧光效应的物质。荧光是某些物质本身发射出的光，而非光源发出的光。某些物质当受到激发光照射后，获取到能量，原子的最外层电子会发生能级跃迁，由基态变为激发态，当激发态回到基态时，会发射出荧光，发射出的荧光将会被荧光检测器检测到，从而达到检测目的。

激发波长和发射波长

不同于紫外检测器，我们在使用荧光检测器时要同时设置两个波长，即激发波长和发射波长。如氨基甲酸酯类检测，方法中需要设置：EX （激发波长）330nm ，EM（发射波长）465nm。激发波长330nm用来激发待测物原子的外层电子由基态变为激发态，发射波长465nm是待测物发射出的其中一个固定波长的荧光，将会被荧光检测器检测到。

一个光源和两个光路

荧光检测器是“高配”版本的检测器，因为荧光检测器全系标配“氙气大灯”，它的光源是亮度极高的氙灯。

氙灯点亮后能够提供激发光光谱，经过激发光光路分光后，形成固定波长的激发光，方法中设定的激发波长是激光发光谱中筛选出的激发效果最优的波长，用来激发待测物原子的外层电子，使之能够形成能级跃迁。待测物原子的外层电子状态由激发态回归至基态时，发射出荧光光谱，这些荧光将会被发射光光路接收，经过发射光路分光后，检测器将检测到固定波长的荧光，从而完成定量工作。

同时，荧光光谱也可用来鉴别荧光物质，也有定性方面的应用。

选择合适的激发波长和发射波长，对检测的灵敏度和选择性都很重要，将直接影响检测的灵敏度和专一性。

图示：荧光检测器的氙灯

图示：荧光检测器RF-10AXL的光路

荧光检测器能量

能量是判断检测器状态的最直接指标，荧光检测器能量有两个：即样品池能量和参比池能量。参比池能量代表激发光的强度，只要氙灯是点亮状态，仪器状态正常，那么参比池能量就一直是有的。而对于样品池能量，好多用户都问过同一问题：参比池能量是正常的，样品池能量是零，仪器是不是出故障了？这是一个比较经典的问题。

对于紫外检测器，样品池能量和参比池能量如果有一个零，这个状态肯定是不正常的，无法继续检测。而对于荧光检测器，平衡系统时还有出峰的前后，样品池的能量一般是零或者极低，因为荧光是待测物本身发出的光，没有待测物流经流通池，也就没有荧光发射出来，所以检测器就检测不到荧光，样品池能量当然是零。只有当待测物经过流通池，软件上基线发生变化的时候，样品池的能量才会从零开始变化，随着出峰结束，样品池能量将再次归零。