液相色谱仪 | 保留时间的影响因素

影响保留时间稳定的因素很多，接下来我们来说说一些常见的影响因素：

当流速变快时保留时间会变小，流速变慢时保留时间会变大。日常使用时除非方法设定错误，否则流速很少会变快；常见的就是实际流速变慢了。漏液（包括外漏和柱塞杆密封圈内漏）、和泵送液不稳定（有气泡，单向阀工作不良，泵前管路堵塞导致流动相吸不上来，泵体磨损）是导致流速不稳定的两个主要原因。外漏可以直接肉眼观察，内漏查看柱塞杆清洗液是否增多；送液不稳定时一般都伴随着压力波动。

预混合好的流动相，可能会因为流动相的挥发导致保留时间不稳定。

如果是二元高压梯度系统中一个泵的实际流速不准确就会导致流动相的实际比例不准，保留时间不稳。四元低压梯度系统中导致流动相比例不稳的常见原因是比例阀磨损漏液或者堵塞；当比例较为极端时（比如98：2），可能会因为流动相的粘度和涡流等原因导致比例不稳定，此时在我们的i-series液相中可以通过加大LPGE的循环来减少干扰。

在反相色谱中，经常会在流动相中加入缓冲盐来达到合适的分离度。当流动相pH值接近某个化合物的pKa时，会使样品保留时间容易出现变化，即使改变0.1的pH值也可以使化合物的保留因子发生10%的变化；如果使用了会挥发或易分解的缓冲盐（比如：碳酸氢铵）就可能导致保留时间不稳定。

缓冲容量指的是缓冲液维持恒定pH值的能力，取决于缓冲液的pKa和浓度。当缓冲液的pKa与流动相的pH相近时，即使低浓度也具有较强缓冲能力；流动相的缓冲容量一般与缓冲液浓度成正比关系。如果缓冲容量不足，而进样量较大时可能会导致保留时间不稳定。

色谱柱如果和流动相没有得到充分的平衡就会导致保留时间漂移，使用新色谱柱时这个现象较为普遍。如果色谱柱受到污染、填料变质等情况会使平衡状态很难达到，按照色谱柱说明书使用、保存色谱柱是很有必要的。

柱温每升高一度，保留因子就会减少1%~2%，如果没有柱温箱，当室温发生变化时保留时间就会发生波动。即使使用了柱温箱，环境温度也会对色谱柱的实际温度产生一定的干扰，大幅度的室温变化温度仍然会导致保留时间漂移。