月黑风高，警惕液相“杀手”

今天我们要讨论一下

液相色谱仪 — 杀手联盟

头号杀手 — 气泡

 

 

 

对于液相实验猿，相信都跟气泡遭遇过。泵头中有气泡会造成压力波动，进样器中有气泡会导致进样量不准，检测器中有气泡会造成基线波动……这一系列问题严重影响检测，如何能够减少气泡呢？

流动相（包括洗针液）脱气一般分两步走，超声脱气和脱气机脱气。超声脱气可以除掉流动相中大部分气泡，流动相中剩余的气泡还有以后流动相中再溶解进的气泡是需要脱气机来脱气的。

需要注意的是：这两种脱气手段要双管齐下，缺一不可。

超声波的功率可以调的大一些，有些实验室的超声波工作时声音非常小，这样就不能保证超声脱气的效果，另外超声的时间也不用很长，一般10-15分钟就足够了。如果流动相超声时间过长，流动相温度会变高，还要花时间冷却，同时长时间超声流动相配比也会发生改变。

在线脱气机串联于泵前端，流动相在进入泵之前，先经过脱气机脱气。对于四元低压系统，在线脱气机是必配的。对于二元高压系统，由于是泵后混合，高压中气泡不易生成，虽然如此，为了消除掉泵前出现的气泡，最好也要配置脱气机。

二号杀手 — 缓冲盐

 

 

 

对于反相色谱和离子色谱，缓冲盐是经常使用的，对于正相色谱，基本不用缓冲盐。

最佳的液相方法当然是流动相选用纯水相和有机相不含缓冲盐或离子对试剂，但是理想很丰满，现实很骨感，有些样品的分离并不容易。有时为了稳定流动相pH值，改善分离效果，改善峰形等，流动相中必须要加入缓冲盐或离子对试剂。

缓冲盐类既可以从结晶状态变成溶解状态，也可以反过来进行，实验的过程中，流动相中溶解的缓冲盐也会缓慢的结晶。如果结晶出的盐不能及时处理掉，可能会造成仪器的堵塞或磨损。

✔ 以下只针对流动相含有缓冲盐的情况。

两种解决方法

缓冲盐的结晶会出现在柱塞杆和柱塞密封圈上，如不及时处理，会严重影响柱塞杆和密封圈的使用寿命，甚至可能会腐蚀泵头的金属部件，造成更大的损失，这时需要对柱塞杆和密封圈进行清洗。泵头清洗一般有两种方式，手动清洗或自动清洗，清洗液用10%异丙醇水溶液。对于手动清洗，每间隔1-2小时，用注射器打入清洗液10-20mL，缓慢注入。注意：仪器在运行过程中，也是可以手动打清洗液的。对于自动清洗装置，清洗液每1-2天更换一次。

实验结束后，要先用5-10%甲醇水溶液冲洗系统和色谱柱（针对C18）30min，可以将系统中及柱子中结晶的盐冲洗干净，再冲纯甲醇20min保存仪器和色谱柱（针对C18）。实验开始前，含盐流动相最好不要直接进LC，含盐流动相如果直接接触有机相，盐结晶的速度会很快，先用水相过渡一下再冲流动相可减少缓冲盐析出。

三号杀手 — 长菌

 

 

 

这个问题我也曾多次遇到，最严重的情况是用户的流动相管路都变绿了。水相长时间不更换一定会长菌，特别是含有缓冲盐的水相长菌更快，尤其是在夏天室温高的时候。

四种解决方法

每次实验都用新水，剩余的流动相不要反复过滤使用。

吸滤头长菌后，会发现不断有气泡从吸滤头处产生，说明吸滤头被堵塞了，轻度堵塞，可以用5%稀硝酸超声处理。严重堵塞如果超声后无效就需要更换新的吸滤头了。

流动相瓶的内壁及瓶底也是容易忽略的地方，时间一长，内壁和瓶底会长出白白的一层菌，所以流动相瓶要定期清洗，每次实验要用清洗过的流动相瓶。

最重要的一点，实验结束后，一定记得要把水相置换成有机相。特别是节假日之前，一定记得做哦。

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