实用干货丨速看！关于梯度优化的聊天记录曝光！

灵魂拷问:

梯度程序

你知道如何优化吗？

不

会

烦

了

1.  梯度陡度（T）对梯度洗脱的影响

T越大，k越小，在N、ɑ不变的情况下，R越小

图(a)、(b)、(c)、(d)分别是5min、10min、20min、40min之内组分B比例由10%升高到60%的结果，T越小，分离度越好。

2.强洗脱溶剂组分(B)浓度变化范围的影响：

注意：

a.  样品流出的谱峰不要太靠近色谱图的开始处，最好第一个谱峰的保留时间为死时间t_M的2倍，无浪费的保留时间（如B浓度值较低，则谱图起始较空旷，如B浓度值过高，则图谱后部较空旷）

b.  在梯度洗脱结束前，所有峰都从色谱柱洗脱出来

(a)(b)(c)图初始比例分别为甲醇-水（50：50）、甲醇-水（60：40）、甲醇-水（80：20），初始比例甲醇的比例越低，第一个峰出峰越晚。

3.柱温、流速变化对保留值的影响

梯度洗脱中，柱温、流速相对分离效果的影响会相对较小

4.梯度洗脱的滞后现象对保留值的影响

由于实际仪器的条件不同，会出现梯度洗脱向后平移一段时间，此时间即为滞后时间，此时间会导致组分峰的保留时间变化，从而改变各组分峰的相对位置。

先走一个线性梯度程序，在20min内，有机相从5%-10%到90%—100%，让所有的峰全部走出来，并优化梯度，分别比较了10min,15min,20min之内有机相从5%升至100%，结果如下：

从图上看到，15min之内有机相比例从5%升至100%梯度下，分离度最理想。

优化梯度（小范围地提高某两个峰的分离度）

• 上图中，峰3、峰4的分离度达不到要求，因为滞留时间的存在可能会使得峰展宽，所以通过优化滞留体积，峰形、分离度都有了明显改善：

•  以上优化后，各峰分离度有了明显改善，但峰7、峰8分离度还没有达到基线分离，通过减小这段时间的梯度陡度尝试提高峰7、峰8的分离度，优化条件以及对应的谱图如下：

图谱对比情况：

再次优化（设置合理的柱平衡时间）

连续进样，发现重现性不好， 梯度程序中增加了平衡时间后，重现性有了明显改善：